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《凝血因子活性測(cè)定技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》

一、范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用一期法檢測(cè)凝血因子（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ）活性測(cè)定的技術(shù)要求。由于方法學(xué)不一致，本文件不涉及纖維蛋白原檢測(cè)和凝血因子X(jué)III的檢測(cè)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于開(kāi)展凝血因子活性檢測(cè)的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，用于規(guī)范相應(yīng)的檢測(cè)過(guò)程和質(zhì)量控制。

二、規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

WS/T 359 血漿凝固實(shí)驗(yàn)血液標(biāo)本的采集及處理指南

三、術(shù)語(yǔ)與定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義也適用于本文件。

1、凝血酶原時(shí)間

血漿與凝血活酶試劑（例如，組織因子）和氯化鈣反應(yīng)后發(fā)生凝固所需要的時(shí)間。

[來(lái)源：WS/T 359-2011，2.1]

2、活化部分凝血活酶時(shí)間

血漿與適量的氯化鈣（CaCl2）、部分凝血活酶試劑盒接觸因子激活劑（如白陶土）反應(yīng)后發(fā)生凝固所需要的時(shí)間。

[來(lái)源：WS/T 359-2011，2.2]

3、定標(biāo)曲線(xiàn)、校準(zhǔn)曲線(xiàn)、參考曲線(xiàn)

定量反映凝血因子活性與纖維蛋白形成所需時(shí)間之間的相互關(guān)系的曲線(xiàn)。

4、定標(biāo)血漿、校準(zhǔn)血漿、參考血漿

已知凝血因子活性的枸櫞酸鈉抗凝的正?；旌涎獫{，用于制備定標(biāo)曲線(xiàn)。

5、乏因子血漿

缺乏待測(cè)凝血因子的血漿。

6、質(zhì)控血漿

源于人或動(dòng)物血，或者人工制成的新鮮、冰凍或凍干的血漿，用于質(zhì)量控制。

7、緩沖液

具備緩沖酸堿能力的液體，如Owrens緩沖液、咪唑緩沖液等。

8、檢測(cè)系統(tǒng)

用于檢測(cè)或評(píng)估特定物質(zhì)存在與否，或?qū)ρ骸Ⅲw液中的物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的一組裝置。檢測(cè)系統(tǒng)包括操作說(shuō)明和所有的儀器、設(shè)備、試劑及（或）獲得檢測(cè)結(jié)果所需的物品。

四、檢驗(yàn)前過(guò)程

1、標(biāo)本采集

依照 WS/T 359的要求進(jìn)行標(biāo)本采集。選擇塑料針筒或者負(fù)壓采血系統(tǒng)，建議成年人血樣采集使用19G或21G針頭，嬰幼兒血樣采集使用22G或23G針頭，靜脈穿刺采血時(shí)，應(yīng)規(guī)范采血流程，一次穿刺成功，盡量避免引起凝血因子激活的操作。若患者的血細(xì)胞比容異常升高（Hct≥55%），應(yīng)按 WS/T 359推薦 的公式進(jìn)行抗凝劑比例的調(diào)整。

標(biāo)本采集前患者應(yīng)處于平靜和空腹?fàn)顟B(tài)，劇烈運(yùn)動(dòng)和應(yīng)激反應(yīng)可使因子Ⅷ活性增加（其作用可持續(xù) 30 min）；脂血可使因子Ⅶ活化，同時(shí)干擾以光學(xué)法為原理的凝血儀的檢測(cè)結(jié)果，此時(shí)可改用手工或磁珠原理凝血儀進(jìn)行測(cè)定。

2、標(biāo)本運(yùn)送、處理和保存

（1）標(biāo)本采集后應(yīng)確認(rèn)無(wú)血凝塊存在，采集后宜在1 h內(nèi)送檢，采用規(guī)定的離心速度和離心時(shí)間（室溫、1500 g、不少于15 min）分離血漿，以獲得乏血小板血漿（血小板計(jì)數(shù)＜10 ×109/L），4 h內(nèi)完成血漿標(biāo)本檢測(cè)。

（2）依照 WS/T 359的要求在常溫下進(jìn)行標(biāo)本運(yùn)送，標(biāo)本應(yīng)在采集后盡快送檢（若不能及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)在分離血漿后置于4℃冰箱4 h內(nèi)完成檢測(cè)）。冰凍血漿在-20℃條件下最多可保存2周，在-70℃條件下最多可保存6個(gè)月。

（3）若使用冷藏標(biāo)本，檢測(cè)前應(yīng)將標(biāo)本于室溫放置15 min～20 min使其恢復(fù)至室溫。

（4）若使用冰凍血漿標(biāo)本，應(yīng)將其置于37℃水浴快速?gòu)?fù)融至少4 min～5 min，檢測(cè)前標(biāo)本應(yīng)充分混勻。

3、標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂不合格標(biāo)本的拒收標(biāo)準(zhǔn)，包括（但不限于以下內(nèi)容）：

a)申請(qǐng)單和試管標(biāo)簽上的信息不一致、試管條碼信息錯(cuò)誤、試管標(biāo)簽或試管條碼脫落；

b)從標(biāo)本采集到實(shí)驗(yàn)室接收標(biāo)本的時(shí)間不符合實(shí)驗(yàn)室的規(guī)定；

c)當(dāng)標(biāo)本存在凝塊、溶血、抗凝劑使用錯(cuò)誤或采血量不當(dāng)（與標(biāo)示量相差超過(guò)±10%）時(shí)。

4、標(biāo)本誤差來(lái)源

標(biāo)本誤差來(lái)源包括（但不限于以下內(nèi)容）：

a)采血量不當(dāng)（與標(biāo)示量相差超過(guò)±10%）；

b)使用非規(guī)定的抗凝劑（如EDTA鹽或草酸鹽）、抗凝劑的濃度、用量不準(zhǔn)確；

c)標(biāo)本有凝塊、溶血、黃疸、脂血或混濁；

d)標(biāo)本混勻不當(dāng)，混勻不充分或劇烈混勻，產(chǎn)生氣泡等；

e)采血器或貯血管不潔，或受到污染；使用非規(guī)定、不適當(dāng)?shù)臉?biāo)本采集管；

f)血細(xì)胞比容高于或等于55%；

g)急性炎癥反應(yīng)、纖維蛋白原升高或纖維蛋白原異?？墒共捎肞T途徑測(cè)定的凝血因子活性不準(zhǔn)確；

h)延遲檢測(cè)或使用不標(biāo)準(zhǔn)的方法處理、運(yùn)送及貯存測(cè)試標(biāo)本。

五、檢驗(yàn)過(guò)程

1、檢測(cè)系統(tǒng)

（1）檢測(cè)方法原理

a)一期法檢測(cè)

檢測(cè)原理：基于檢測(cè)待測(cè)標(biāo)本對(duì)乏因子血漿所致的凝固時(shí)間（PT 或 APTT）延長(zhǎng)的糾正能力。將稀釋后的待測(cè)血漿與乏因子血漿混合后進(jìn)行 PT 或 APTT 檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果與待測(cè)血漿中的凝血因子活性呈負(fù)相關(guān)。通過(guò)使用已知凝血因子活性的血漿進(jìn)行系列稀釋并與乏因子血漿混合后進(jìn)行PT或APTT檢測(cè)建立的定標(biāo)曲線(xiàn)，可以得出待測(cè)血漿中相應(yīng)凝血因子的活性。一期法檢測(cè)是目前常用的凝血因子活性測(cè)定方法。

基于 PT 檢測(cè)的凝血因子：因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ

基于 APTT 檢測(cè)的凝血因子：因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ與Ⅻ

b）二期法檢測(cè)

該方法適用于因子Ⅷ/Ⅸ活性檢測(cè)，以因子Ⅷ活性檢測(cè)為例，其原理為：基于檢測(cè)因子Ⅷ作為輔因子與因子Ⅸa形成復(fù)合物活化因子Ⅹ的能力，通過(guò)檢測(cè)生成的因子Ⅹa的量可計(jì)算因子Ⅷ的活性。該實(shí)驗(yàn)分為兩步進(jìn)行，第一步：待測(cè)標(biāo)本與含有磷脂、鈣離子、因子Ⅸa以及因子Ⅹ的試劑溶液進(jìn)行孵育后生成因子Ⅹa；第二步再加入過(guò)量的凝血酶原和纖維蛋白原，檢測(cè)纖維蛋白凝塊形成的時(shí)間。測(cè)得的凝固時(shí)間可以通過(guò)查對(duì)已知凝血因子活性的定標(biāo)曲線(xiàn)或代入回歸方程，得到凝血因子活性。

c）發(fā)色底物法檢測(cè)

該方法是二期法檢測(cè)的改進(jìn)方法，在因子Ⅷ活性檢測(cè)時(shí)使用。第一步：待測(cè)標(biāo)本與含有磷脂、鈣離子、因子Ⅸa以及因子Ⅹ的試劑孵育后生成因子Ⅹa；第二步加入因子Ⅹa的發(fā)色底物進(jìn)行檢測(cè)，因子Ⅹa 可作用在發(fā)色底物S2765，使其釋放對(duì)硝基苯胺（paranitroaniline，pNA），后者可在405 nm波長(zhǎng)條件下通過(guò)讀取吸光度值計(jì)算該物質(zhì)的生成量，通過(guò)計(jì)算轉(zhuǎn)換為凝血因子活性。

2、檢測(cè)系統(tǒng)選擇

（1）實(shí)驗(yàn)室宜選用儀器與試劑配套的檢測(cè)系統(tǒng)。使用非配套檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)確認(rèn)該系統(tǒng)是否能滿(mǎn)足性能驗(yàn)證要求。

（2）實(shí)驗(yàn)室在選擇檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)考慮的因素（但不限于以下內(nèi)容）包括：

a)臨床標(biāo)本性狀：黃疸、脂濁等影響光散射強(qiáng)度的標(biāo)本，適宜選擇物理學(xué)檢測(cè)原理的檢測(cè)系統(tǒng)（如磁珠法）進(jìn)行測(cè)定；

b)標(biāo)本數(shù)量與檢測(cè)速度：檢測(cè)系統(tǒng)能夠在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成常規(guī)標(biāo)本和急診標(biāo)本的測(cè)定。

2、試劑和耗材

（1）APTT 試劑

不同APTT試劑由于激活劑的不同而對(duì)凝血因子活性檢測(cè)的敏感性存在差異。檢測(cè)凝血因子缺乏時(shí)，宜選用對(duì)凝血因子缺乏有高敏感性的APTT試劑（可檢出凝血因子活性＜30%的標(biāo)本，包括凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等）。針對(duì)懷疑存在狼瘡抗凝物的標(biāo)本，宜使用對(duì)磷脂不敏感的APTT試劑盒。實(shí)驗(yàn)室在更換APTT試劑批號(hào)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行新舊試劑的比對(duì)：根據(jù)驗(yàn)證標(biāo)本的目標(biāo)水平（驗(yàn)證標(biāo)本應(yīng)盡量覆蓋檢測(cè)項(xiàng)目的可報(bào)告范圍，并至少包含正常水平和異常水平）、各水平的確定臨界值、不精密度值等參數(shù)來(lái)確定所需標(biāo)本數(shù)，分別采用新舊試劑進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算偏差和平均偏差絕對(duì)值，并與拒絕限進(jìn)行比較，判斷批號(hào)間驗(yàn)證是否通過(guò)。

（2）PT 試劑

不同PT試劑中凝血活酶因其來(lái)源不同（可來(lái)自人、兔、牛、猴等腦或其他組織）而具有不同的敏感度。應(yīng)選擇敏感度高（ISI接近1）的凝血活酶試劑，實(shí)驗(yàn)室在更換凝血活酶試劑時(shí)，應(yīng)對(duì)其ISI值進(jìn)行評(píng)估。

（3）乏因子血漿

乏因子血漿應(yīng)符合以下要求：待測(cè)的目標(biāo)凝血因子活性低于0.01 IU/mL（1%），其他凝血因子活性高于0.5 IU/mL（50%），纖維蛋白原含量高于1.0 g/L。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)每個(gè)批次的乏因子血漿進(jìn)行檢測(cè)，以確保所用的乏因子血漿質(zhì)量符合上述要求。乏因子血漿應(yīng)在冷藏（凍干形式）或冰凍（貯存-70℃冰箱）條件下妥善保存。

（4）定標(biāo)血漿

通常使用商品化的標(biāo)準(zhǔn)血漿或校準(zhǔn)血漿，其標(biāo)示值需溯源至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如世界衛(wèi)生組織發(fā)布的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品）。若實(shí)驗(yàn)室自行制備定標(biāo)血漿，應(yīng)至少使用20例以上健康志愿者（男女各半，年齡18歲～55歲，六個(gè)月內(nèi)未服用任何藥物，女性未處于妊娠期或月經(jīng)期）的混合血漿。血漿制備時(shí)需進(jìn)行兩次離心，將第一次離心獲得的乏血小板血漿的上層2/3體積轉(zhuǎn)移入加塞塑料試管進(jìn)行第二次離心（室溫、1500 g、不少于15 min），注意不要使用第二次離心后的底部血漿，以確保充分去除血小板，以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為溯源標(biāo)準(zhǔn)確定其凝血因子活性水平，并保證凝血因子的活性在（1±0.2）IU/mL。

（5）試劑誤差來(lái)源

試劑誤差來(lái)源包括（但不限于以下內(nèi)容）：

a)試劑已被污染；

b)配制的試劑未采用 I 級(jí)試劑級(jí)水或廠(chǎng)家zhi定用水、復(fù)溶時(shí)使用非規(guī)定的稀釋液、復(fù)溶時(shí)稀釋液加量不準(zhǔn)；

c)在運(yùn)輸或貯存過(guò)程中，因處置不當(dāng)(如溫度等因素)而導(dǎo)致試劑變質(zhì)；

d)所用試劑超過(guò)了有效期或復(fù)溶后的穩(wěn)定期。

3、定標(biāo)曲線(xiàn)制作

（1）正常值定標(biāo)曲線(xiàn)

采用全自動(dòng)血液凝固分析儀進(jìn)行凝血因子活性檢測(cè)時(shí)，可按照儀器生產(chǎn)廠(chǎng)商的要求預(yù)先設(shè)定參考血漿的稀釋比例并使用配套參考血漿制作定標(biāo)曲線(xiàn)。參考血漿的稀釋比例應(yīng)至少包括 1/10、1/20、 1/40 和 1/80 四個(gè)水平。采用手工法或半自動(dòng)血液凝固分析儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需根據(jù)不同比例稀釋標(biāo)本的 PT 或 APTT 檢測(cè)結(jié)果與對(duì)應(yīng)的稀釋比例在半對(duì)數(shù)或雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上手工繪制定標(biāo)曲線(xiàn)。（示例見(jiàn)附錄 A）

定標(biāo)曲線(xiàn)的線(xiàn)性回歸方程的 r 值應(yīng)在 0.998～1.000，斜率應(yīng)在 0.9～1.1。

頻率：對(duì)于采用手工法或半自動(dòng)方法進(jìn)行凝血因子活性檢測(cè)時(shí)，每批次均需建立本次的定標(biāo)曲線(xiàn)；全自動(dòng)檢測(cè)方法在試劑批號(hào)更換、儀器設(shè)備調(diào)整、室內(nèi)質(zhì)控失控等情況下需重新建立定標(biāo)曲線(xiàn)。

（2）低值定標(biāo)曲線(xiàn)

針對(duì)低值標(biāo)本（凝血因子活性水平＜5%）應(yīng)建立低值定標(biāo)曲線(xiàn)，定標(biāo)血漿可按照1/20、1/40、1/80……的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)溆嘁笸６?biāo)曲線(xiàn)的制備。

4、性能驗(yàn)證

（1）性能驗(yàn)證一般要求

a）新的檢測(cè)系統(tǒng)用于臨床檢測(cè)前，依據(jù)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行校準(zhǔn)和性能驗(yàn)證，至少應(yīng)包括批內(nèi)精密度、批間精密度、正確度和可報(bào)告范圍等。

b）驗(yàn)證周期：在更換設(shè)備、組件以及試劑時(shí)需要進(jìn)行性能驗(yàn)證。

（2）重復(fù)性

重復(fù)性又稱(chēng)批內(nèi)精密度，是以連續(xù)檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)（CV）為評(píng)價(jià)指標(biāo)。重復(fù)精密度的驗(yàn)證方法：至少使用兩個(gè)濃度水平（包含正常和異常水平）的新鮮臨床標(biāo)本或質(zhì)控物進(jìn)行檢測(cè)，每個(gè)標(biāo)本按常規(guī)方法重復(fù)檢測(cè) 11 次，剔除第 1 次檢測(cè)結(jié)果，計(jì)算后 10 次檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)。內(nèi)源性凝血因子(APTT 途徑)和外源性凝血因子(PT途徑)的正常標(biāo)本和異常標(biāo)本的 CV 應(yīng)均≤10%。

（3）期間精密度

期間精密度又稱(chēng)為批間精密度，以室內(nèi)質(zhì)控檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)。批間精密度的驗(yàn)證方法：至少使用兩個(gè)濃度水平（包含正常和異常水平）的質(zhì)控物或臨床標(biāo)本，在標(biāo)本檢測(cè)當(dāng)天至少進(jìn)行1次室內(nèi)質(zhì)控，剔除失控?cái)?shù)據(jù)后按批號(hào)或按月份，計(jì)算累計(jì)在控?cái)?shù)據(jù) 20 次結(jié)果的變異系數(shù)。內(nèi)源性凝血因子(APTT 途徑)和外源性凝血因子(PT途徑)的正常標(biāo)本和異常標(biāo)本的 CV 應(yīng)均≤15%。

（4）正確度

正確度以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或商業(yè)校準(zhǔn)物實(shí)際檢測(cè)結(jié)果與理論值的偏倚（Bias）為評(píng)價(jià)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡可能使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（如國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)）進(jìn)行正確度驗(yàn)證，在無(wú)法得到上述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的情況下，可使用商業(yè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。正確度的驗(yàn)證方法：將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋至預(yù)期濃度水平（如醫(yī)學(xué)決定水平）并至少重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算檢測(cè)結(jié)果的均值與理論值的百分偏差，要求百分偏倚（Bias）應(yīng)≤15%。

5、檢測(cè)程序

（1） 標(biāo)準(zhǔn)操作程序的建立與實(shí)施

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)依照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》、本文件和儀器試劑生產(chǎn)廠(chǎng)商的操作說(shuō)明制定各檢測(cè)項(xiàng)目的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（Standard Operation Procedure，SOP）文件，并嚴(yán)格按照 SOP 文件的要求進(jìn)行操作。

（2）檢測(cè)方法的選擇

因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ的活性均可使用一期法進(jìn)行檢測(cè)，因子Ⅷ/Ⅸ活性檢測(cè)還可使用二期法和發(fā)色底物法。由于方法特性的不同，由某些特定基因突變位點(diǎn)導(dǎo)致的血友病 A 患者其因子Ⅷ：C一期法檢測(cè)結(jié)果與臨床出血表現(xiàn)不相符，可采用二期法和發(fā)色底物法進(jìn)行測(cè)定。

（3）待測(cè)血漿標(biāo)本的稀釋要求

應(yīng)根據(jù)檢測(cè)的凝血因子制定相應(yīng)的血漿稀釋倍數(shù)，目的是為了得到一個(gè)具有可接受斜率的曲線(xiàn)。因子Ⅷ和Ⅸ活性檢測(cè)血漿標(biāo)本至少應(yīng)進(jìn)行 2 個(gè)稀釋度的檢測(cè)，有條件的實(shí)驗(yàn)室可進(jìn)行 3 個(gè)稀釋度的檢測(cè)，對(duì)于低值標(biāo)本可降低稀釋倍數(shù)。

（4）檢測(cè)系統(tǒng)誤差的來(lái)源

檢測(cè)系統(tǒng)誤差來(lái)源包括（但不限于以下內(nèi)容）：

a)定標(biāo)時(shí)錯(cuò)誤輸入?yún)⒖佳獫{數(shù)值；

b)使用曲線(xiàn)的平臺(tái)區(qū)解釋結(jié)果；

c)不正確的孵育或活化時(shí)間；

d)儀器操作方法不正確；

e)儀器故障:如光源不穩(wěn)定、溫度波動(dòng)、試劑濺出、試劑加入不準(zhǔn)(量少)及電子干擾等；

f)稀釋不正確；

g)冰凍血漿在-70℃條件下貯存超過(guò) 6 個(gè)月或者不適當(dāng)?shù)馁A存環(huán)境；

h)乏因子基質(zhì)血漿含有＞0.01 IU/mL(1%)的凝血活性，或含有凝血因子抑制物，或一個(gè)/多個(gè)凝血因子活性＜50%。

6、室內(nèi)質(zhì)量控制

（1）質(zhì)控血漿的選擇：實(shí)驗(yàn)室可使用商業(yè)質(zhì)控血漿或自制質(zhì)控血漿（冰凍血漿）進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，質(zhì)控血漿應(yīng)至少具有 2 個(gè)濃度水平（包含正常水平和異常水平），使用自制質(zhì)控血漿時(shí)應(yīng)與商業(yè)質(zhì)控血漿進(jìn)行同步檢測(cè)以評(píng)價(jià)其適用性。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)實(shí)際工作需要確定質(zhì)控血漿的數(shù)量，避免質(zhì)控血漿批號(hào)更換過(guò)于頻繁。

（2）頻率：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本量或檢測(cè)批次確定室內(nèi)質(zhì)控的頻率，并保證每次開(kāi)機(jī)檢測(cè)標(biāo)本前至少進(jìn)行一次正常水平和異常水平的室內(nèi)質(zhì)控；使用新開(kāi)瓶/新復(fù)溶試劑進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)前，宜首先進(jìn)行質(zhì)控品檢測(cè)。

（3）質(zhì)控均值和允許范圍的確定：每個(gè)批號(hào)質(zhì)控血漿在使用前，應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室通過(guò)檢測(cè)確定均值和允許范圍，質(zhì)控品制造商規(guī)定的“標(biāo)準(zhǔn)值"和“允許范圍"只能作為參考。具體方法為：將質(zhì)控血漿至少檢測(cè) 10 d，每天至少檢測(cè) 2 次，剔除超出 3SD 外數(shù)據(jù)，輸入 20 次結(jié)果完成初始化，以 20 次數(shù)據(jù)形成的均值作為當(dāng)月質(zhì)控圖的中心線(xiàn)。SD、CV 在月末完成數(shù)據(jù)錄入并確認(rèn)后生成標(biāo)值自動(dòng)傳遞給下一月進(jìn)行積累，這樣每個(gè)月進(jìn)行標(biāo)值累積，直至累積達(dá)到zhi定月數(shù)（3～5個(gè)月），計(jì)算累積均值和累積標(biāo)準(zhǔn)差，以此作為室內(nèi)質(zhì)控均值和標(biāo)準(zhǔn)差；室內(nèi)質(zhì)控建議選用 Westergard 質(zhì)控規(guī)則，至少包括 13s 和 22s 規(guī) 則，其余可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況酌情選用。

（4）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)記錄結(jié)果并統(tǒng)計(jì)均值與標(biāo)準(zhǔn)差，繪制質(zhì)控圖。若發(fā)現(xiàn)結(jié)果失控應(yīng)按步驟分析查找原因（檢查試劑、質(zhì)控血漿及儀器等），待各因素排查后再進(jìn)行質(zhì)控血漿的檢測(cè)，質(zhì)控結(jié)果在控后方可進(jìn)行待測(cè)標(biāo)本的檢測(cè)。做好失控原因分析和采取的糾正措施記錄。

（5）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期（每月）統(tǒng)計(jì)室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，結(jié)果應(yīng)符合 （上述“3"質(zhì)控均值和允許范圍的確定）的要求。

7、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)

（1）實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)組織開(kāi)展的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)，以保證采用相同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)之間結(jié)果的可比性。

（2）對(duì)于沒(méi)有開(kāi)展室間質(zhì)評(píng)的項(xiàng)目應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果比對(duì)，以保證不同實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的可比性。

8、檢驗(yàn)結(jié)果的比對(duì)

若實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用多個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定同一種分析物時(shí)，應(yīng)定期進(jìn)行結(jié)果比對(duì)（宜半年一次），至少使用20份臨床標(biāo)本（覆蓋正常和低值標(biāo)本）按照常規(guī)操作流程進(jìn)行檢測(cè)，正常濃度標(biāo)本的比對(duì)偏倚應(yīng)≤15%，低值濃度標(biāo)本的比對(duì)偏倚應(yīng)≤30%（或按照生產(chǎn)廠(chǎng)家和試劑說(shuō)明書(shū)要求）。

六、檢驗(yàn)后過(guò)程

1、參考區(qū)間

對(duì)于每個(gè)凝血因子，實(shí)驗(yàn)室可參照文獻(xiàn)報(bào)道的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證后使用。若不適用，應(yīng)根據(jù)所用儀器、試劑、采血方法、主要就醫(yī)人群（成人或兒童）及所用抗凝劑建立適用于本室的參考區(qū)間。參考區(qū)間以相同的單位顯示在每一份報(bào)告單上。

2、報(bào)告結(jié)果

報(bào)告前，應(yīng)確定待測(cè)標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果已乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，采用不同稀釋比例測(cè)定值的平均值作為報(bào)告結(jié)果。報(bào)告單位為活性%或 IU/mL 均可，但需在檢驗(yàn)報(bào)告中統(tǒng)一規(guī)范凝血因子活性報(bào)告單位及格式。超出定標(biāo)曲線(xiàn)值以外的結(jié)果亦可報(bào)告以大于或小于相應(yīng)的可讀值報(bào)告，但應(yīng)與臨床聯(lián)系，共同確定其原因。舉例說(shuō)明請(qǐng)見(jiàn)附錄 B。

當(dāng)懷疑凝血因子存在結(jié)構(gòu)異常時(shí)，可考慮檢測(cè)抗原，但抗原檢測(cè)不是常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，多用于科研。

3、結(jié)果判讀誤差的來(lái)源

可能的結(jié)果判讀誤差來(lái)源包括（但不限于以下內(nèi)容）：

a)未辨認(rèn)出兩條曲線(xiàn)缺乏平行；

b)未辨認(rèn)出兩條曲線(xiàn)缺乏線(xiàn)性；

c)采用推斷的方法得到定標(biāo)曲線(xiàn)范圍之外的數(shù)據(jù)。

附 錄 A

（資料性）

定標(biāo)曲線(xiàn)手工繪制

采用手工法或部分半自動(dòng)血液凝固分析儀進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需根據(jù)不同比例稀釋標(biāo)本的PT或APTT檢測(cè)與 對(duì)應(yīng)的稀釋比例在半對(duì)數(shù)或雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上手工繪制定標(biāo)曲線(xiàn)，圖應(yīng)形成“S"型曲線(xiàn)，兩端扁平，中 間呈線(xiàn)性(圖A.1，圖A.2)。線(xiàn)性區(qū)計(jì)算所得r值應(yīng)在 0.998～1.000、斜率應(yīng)在 0.9～1.1 范圍內(nèi)。

附 錄 B

（資料性）

結(jié)果解讀

待測(cè)血漿標(biāo)本經(jīng)三點(diǎn)稀釋后形成的標(biāo)本結(jié)果曲線(xiàn)應(yīng)形成一條與工作定標(biāo)曲線(xiàn)平行的直線(xiàn)。若以上的情況不存在，應(yīng)該考慮以下可能性：

a)若兩個(gè)或更多鄰近點(diǎn)形成一條平行于定標(biāo)曲線(xiàn)的直線(xiàn)，但沒(méi)有實(shí)驗(yàn)結(jié)果落在可讀范圍之內(nèi)，進(jìn)一 步稀釋參考血漿或受檢血漿則可能產(chǎn)生可讀結(jié)果(見(jiàn)圖B.1)；

b) 若僅一個(gè)試驗(yàn)結(jié)果落在可讀范圍，同時(shí)與鄰近點(diǎn)形成的直線(xiàn)不平行于定標(biāo)曲線(xiàn)，則應(yīng)稀釋受檢 血漿，以便獲得可讀結(jié)果；

c) 若受檢血漿與參考血漿曲線(xiàn)不呈平行，而一個(gè)以上的結(jié)果落在已知的線(xiàn)性范圍內(nèi)，則應(yīng)當(dāng)懷疑 標(biāo)本中有抑制物存在(見(jiàn)圖B.2)。在報(bào)告結(jié)果時(shí)，以最高稀釋度報(bào)告，同時(shí)應(yīng)說(shuō)明標(biāo)本中可能有抑制物， 應(yīng)做有關(guān)檢查確定；

d) 若所有的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均落在線(xiàn)性范圍之外，同時(shí)出現(xiàn)類(lèi)似的試驗(yàn)結(jié)果(不考慮稀釋所造成影響)， 這個(gè)現(xiàn)象提示所有的試驗(yàn)結(jié)果均位于“S"曲線(xiàn)的平臺(tái)區(qū)。這是典型的嚴(yán)重凝血因子缺乏狀態(tài)(見(jiàn)圖B.2)。

這種情況，應(yīng)采用低值定標(biāo)曲線(xiàn)進(jìn)行測(cè)定，并且要求對(duì)標(biāo)本進(jìn)行兩次測(cè)定。若患者血漿的凝固時(shí)間 更延長(zhǎng)，則患者結(jié)果可以低于該凝血因子檢測(cè)低限。

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